Plasmide CRISPR d'Activation (m) IGF-I: sc-421056-ACT

Le gène murin *Igf1* code le facteur de croissance de type insulinique I (IGF‑I), une hormone peptidique sécrétée qui intègre des signaux endocriniens et paracrines afin de réguler la croissance somatique, l’homéostasie du muscle squelettique et de l’os, ainsi que le développement neuronal. La liaison d’IGF‑I à IGF1R active les cascades PI3K–AKT–mTOR et RAS–RAF–MEK–ERK, coordonnant la synthèse protéique, le métabolisme du glucose, la progression du cycle cellulaire et les programmes de survie. Dans les modèles expérimentaux, une expression ou une signalisation d’*Igf1* altérée est associée à des phénotypes de croissance, à une régénération tissulaire compromise, à une dysrégulation métabolique et à des modifications des processus neurodéveloppementaux et neurodégénératifs. Ces voies croisent également l’inflammation et le remodelage de la matrice extracellulaire, faisant d’*Igf1* un nœud clé pour l’étude d’une biologie anabolique et des réponses au stress dépendantes du contexte.

IGF-I Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Igf1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGF-I Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Igf1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Igf1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGF-I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Igf1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGF-I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGF-I dans les cellules tumorales présentant une expression de Igf1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.