IGF-1 Receptor α/β/IGF1R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400084-ACT

IGF1R kodiert den Insulin-like Growth Factor 1-Rezeptor, eine über Disulfidbrücken verbundene α/β-Rezeptor-Tyrosinkinase, die IGF-Liganden bindet und dadurch zelluläres Wachstum, Überleben und Differenzierung reguliert. Nach Aktivierung stößt IGF1R die kanonischen Signalwege PI3K–AKT–mTOR und RAS–RAF–MEK–ERK an und beeinflusst damit den Zellzyklusfortschritt, die Resistenz gegen Apoptose sowie metabolische Programme. Der Crosstalk von IGF1R mit der Insulinrezeptor-Signalgebung und integrinvermittelter Adhäsion prägt zudem in vielen Geweben Motilität und Stressantworten. Eine dysregulierte IGF1R-Expression oder -Signalgebung wird häufig im Kontext onkogener Transformation, therapieresistenter Phänotypen sowie metabolischer oder entwicklungsbedingter Erkrankungen untersucht.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IGF1R-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IGF1R-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IGF1R-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IGF-1 Receptor α/β/IGF1R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IGF1R-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IGF-1 Receptor α/β/IGF1R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IGF-1 Receptor α/β/IGF1R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IGF1R-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.