Plasmide Double Nickase (h) Ig J Chain: sc-403642-NIC

JCHAIN code pour la chaîne J des immunoglobulines, un petit polypeptide sécrété qui permet la polymérisation des IgA et des IgM en reliant leurs régions Fc et en favorisant l’assemblage d’IgA dimériques et d’IgM pentamériques. Cette polymérisation soutient l’immunité des muqueuses et le transport efficace des immunoglobulines polymériques à travers les épithéliums via le récepteur des immunoglobulines polymériques, en s’intégrant aux programmes de différenciation des lymphocytes B et de sécrétion des plasmocytes. L’expression de JCHAIN est étroitement associée aux états de cellules sécrétrices d’anticorps et aux issues de commutation de classe, fournissant un indicateur fonctionnel de la maturation de l’immunité humorale. Des niveaux dérégulés de JCHAIN ont été associés à une défense muqueuse altérée, à des dyscrasies immunitaires et à des cancers dérivés des cellules B, dans lesquels les voies de production et de sécrétion des immunoglobulines sont perturbées.

Ig J Chain Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus JCHAIN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de JCHAIN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de JCHAIN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de JCHAIN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.