Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ig J Chain: sc-403642-ACT

Le gène humain **JCHAIN** code la chaîne J des immunoglobulines, un petit polypeptide sécrété nécessaire à la polymérisation des IgA et des IgM ainsi qu’à la formation d’IgA dimériques et d’IgM pentamériques. La chaîne J des Ig favorise l’assemblage et la stabilité des anticorps multimériques et permet l’interaction avec le récepteur des immunoglobulines polymériques (**PIGR**), ce qui facilite le transport transépithélial des immunoglobulines sécrétoires et la défense immunitaire des muqueuses. Son expression est étroitement liée à la différenciation des lymphocytes B en plasmocytes sécréteurs d’anticorps et coordonnée avec la réponse aux protéines mal conformées (UPR) et les programmes de la voie de sécrétion qui permettent de soutenir une production élevée d’immunoglobulines. Une expression dérégulée de **JCHAIN** est utilisée comme marqueur d’états plasmocytaires et est étudiée dans des contextes incluant l’immunodéficience, l’inflammation chronique et les néoplasies des lymphocytes B / des plasmocytes.

Ig J Chain Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JCHAIN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ig J Chain Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JCHAIN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JCHAIN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ig J Chain. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JCHAIN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ig J Chain au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ig J Chain dans les cellules tumorales présentant une expression de JCHAIN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.