IFT88 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404089-LAC

O IFT88 humano codifica um componente central do complexo de transporte intraflagelar B (IFT-B), que impulsiona o tráfego anterógrado ao longo do cílio primário, permitindo a montagem e a manutenção do axonema e a sinalização ciliar adequada. Ao sustentar a transdução de sinais dependente do cílio, o IFT88 influencia vias como Hedgehog e outros processos acoplados a receptores sensoriais que dependem de uma estrutura ciliar íntegra e do movimento de proteínas. A interrupção ou desregulação do IFT88 compromete a ciliogênese, altera programas transcricionais a jusante e afeta o controle do ciclo celular e da polaridade em tipos celulares ciliados. Consequentemente, o IFT88 é amplamente estudado no contexto de ciliopatias, fenótipos renais e retinianos e defeitos de sinalização do desenvolvimento, nos quais a função do cílio primário é uma variável central.

As Partículas de Ativação Lentivirais IFT88 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de IFT88 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais IFT88 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição IFT88, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de IFT88. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo IFT88 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.