Plásmido CRISPR de Activación (h) IFN-γRβ: sc-402794-ACT

IFNGR2 codifica el receptor 2 del interferón gamma (IFN-γRβ), la subunidad accesoria de señalización del complejo receptor de IFN-γ que se asocia con IFNGR1 para transmitir señales del interferón de tipo II. La unión del ligando promueve la activación de JAK1/JAK2 asociadas al receptor, la fosforilación de STAT1 y programas transcripcionales que moldean el procesamiento y la presentación de antígenos, la activación de macrófagos y las defensas antimicrobianas. A través de esta vía, IFNGR2 influye en la señalización inflamatoria mediante el diálogo cruzado con las redes de IRF y NF-κB y contribuye a respuestas intrínsecas de la célula frente a citocinas inmunitarias. La alteración de la señalización del receptor de IFN-γ es relevante para estudios de desregulación inmunitaria, cambios en las interacciones huésped–patógeno y mecanismos que modulan la vigilancia inmunitaria antitumoral en sistemas modelo humanos.

IFN-γRβ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFNGR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFN-γRβ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFNGR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFNGR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFN-γRβ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFNGR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFN-γRβ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFN-γRβ en células tumorales con expresión de IFNGR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.