Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFN-γRβ: sc-402794-ACT

IFNGR2 code le récepteur 2 de l’interféron gamma (IFN‑γRβ), la sous-unité accessoire de signalisation du complexe récepteur de l’IFN‑γ, qui s’associe à IFNGR1 pour transmettre les signaux de l’interféron de type II. La liaison du ligand favorise l’activation de JAK1/JAK2 associées au récepteur, la phosphorylation de STAT1 et des programmes transcriptionnels qui orientent le traitement et la présentation de l’antigène, l’activation des macrophages et les défenses antimicrobiennes. Par cette voie, IFNGR2 influence les interactions (cross-talk) de la signalisation inflammatoire avec les réseaux IRF et NF‑κB et contribue aux réponses intrinsèques des cellules aux cytokines immunitaires. La perturbation de la signalisation du récepteur de l’IFN‑γ est pertinente pour l’étude de la dérégulation immunitaire, des interactions hôte–pathogène altérées et des mécanismes modulant la surveillance immunitaire antitumorale dans des systèmes modèles humains.

IFN-γRβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFNGR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFN-γRβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFNGR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFNGR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFN-γRβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFNGR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFN-γRβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFN-γRβ dans les cellules tumorales présentant une expression de IFNGR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.