Plásmido Doble Nickase (h) IFN-γRα: sc-401191-NIC

IFNGR1 codifica la subunidad alfa del receptor de interferón gamma (IFN-γRα), la cadena de unión al ligando del complejo receptor de IFN-γ que inicia señales antimicrobianas e inmunomoduladoras en respuesta al IFN-γ. Tras la unión al receptor, las quinasas asociadas JAK1/JAK2 fosforilan STAT1 para activar programas de transcripción que controlan la presentación de antígenos, la activación de macrófagos y la regulación de las respuestas inmunitarias de tipo Th1. Este eje se integra con la detección inmunitaria innata y las redes inflamatorias, influyendo en la expresión de genes estimulados por interferón y de reguladores de retroalimentación como las proteínas SOCS. La desregulación o pérdida de función de IFNGR1 se asocia con una respuesta deficiente al IFN-γ y con fenotipos de defensa del huésped alterados, lo que lo convierte en una diana clave para estudiar defectos de señalización inmunitaria y mecanismos de enfermedad inflamatoria en células humanas.

IFN-γRα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IFNGR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IFNGR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IFNGR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IFNGR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.