Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFN-γRα: sc-401191-ACT

IFNGR1 code la chaîne alpha du récepteur humain de l’interféron‑γ (IFN‑γRα), la sous-unité de liaison au ligand qui initie la signalisation de l’interféron‑γ à la surface cellulaire. Lors de la liaison d’IFN‑γ, IFN‑γRα coopère avec IFNGR2 pour activer JAK1/JAK2 puis STAT1 en aval, déclenchant des programmes transcriptionnels qui régulent la présentation de l’antigène, l’activation des macrophages, ainsi que les réponses antimicrobiennes et inflammatoires. Cette voie s’articule avec les réseaux IRF/ISG et façonne un dialogue entre cytokines qui influence la surveillance immunitaire et l’inflammation tissulaire. Une signalisation IFNGR1 dérégulée a été associée à une altération de la défense de l’hôte et à des pathologies à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie des infections, inflammation et signalisation en immuno‑oncologie.

IFN-γRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFNGR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFN-γRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFNGR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFNGR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFN-γRα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFNGR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFN-γRα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFN-γRα dans les cellules tumorales présentant une expression de IFNGR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.