Plasmide Double Nickase (m) IFN-α/βRβ: sc-421048-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) IFN-α/βRβ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IFN-α/βRβ Double Nickase (m) et le plasmide IFN-α/βRβ Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ifnar2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IFN-α/βRβ Antibody (F-7): sc-137209
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) IFN-α/βRβ | sc-421048-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ifnar2 code le récepteur bêta de l’interféron alpha/bêta (IFN-α/βRβ), une sous-unité essentielle du complexe récepteur de l’interféron de type I, indispensable aux réponses cellulaires à l’IFN-α et à l’IFN-β. La liaison du ligand déclenche des cascades de phosphorylation dépendantes de JAK1/TYK2 qui activent STAT1/STAT2 et IRF9 afin de former le complexe ISGF3, lequel induit la transcription de gènes stimulés par l’interféron régulant la restriction antivirale, la présentation de l’antigène et la programmation de l’immunité innée. La signalisation via IFNAR2 interagit avec les voies NF-κB et MAPK pour moduler la production de cytokines et la différenciation des cellules immunitaires. Une dérégulation de la signalisation de l’interféron de type I est impliquée dans des phénotypes inflammatoires et auto-immuns et influence les interactions tumeur–système immunitaire, faisant d’Ifnar2 une cible fréquente pour les études mécanistiques des réseaux de signalisation immunitaire.
IFN-α/βRβ Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ifnar2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ifnar2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ifnar2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ifnar2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.