Plasmide Double Nickase (h) IFITM3: sc-403281-NIC

IFITM3 (protéine transmembranaire 3 induite par l’interféron) est une protéine membranaire endolysosomale stimulée par l’interféron, qui limite l’entrée des virus enveloppés en restreignant la fusion membranaire et en modulant le trafic endocytaire. Son expression est régulée par la signalisation des interférons de type I/II et contribue aux programmes de défense immunitaire innée qui remodèlent la composition des membranes et la dynamique vésiculaire au cours de l’infection. IFITM3 est également liée aux réponses inflammatoires et a été étudiée pour ses rôles dans la signalisation des cellules immunitaires, les réponses au stress et la biologie tumorale, via des effets sur l’organisation membranaire et le trafic des récepteurs. Des différences génétiques et d’expression d’IFITM3 ont été associées à une variabilité de la susceptibilité et de la sévérité des phénotypes d’infection virale, ce qui étaye sa pertinence dans la recherche sur les interactions hôte–pathogène.

IFITM3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IFITM3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IFITM3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IFITM3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IFITM3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.