Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFIT5: sc-406044-ACT

IFIT5 humain (interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 5) est un produit d’un gène stimulé par les interférons qui participe à la défense immunitaire innée en se liant à des espèces d’ARN, avec une préférence pour les ARN viraux 5′ triphosphorylés, et en modulant la signalisation antivirale en aval. IFIT5 contribue aux réponses aux interférons de type I et module des processus de surveillance de l’ARN qui influencent la traduction cellulaire et les programmes d’expression de gènes inflammatoires. Par ces activités, IFIT5 est fréquemment étudiée dans le contexte des interactions hôte–pathogène et des états induits par les interférons, notamment l’inflammation chronique et la signalisation immunitaire associée aux tumeurs. Une expression altérée d’IFIT5 a été associée à des modifications des réseaux de cytokines et à des phénotypes du métabolisme de l’ARN pertinents pour des études mécanistiques de la dérégulation immunitaire.

IFIT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFIT5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFIT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFIT5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFIT5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFIT5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFIT5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFIT5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFIT5 dans les cellules tumorales présentant une expression de IFIT5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.