Plasmide Double Nickase (h) IFIT3: sc-403557-NIC

La protéine induite par l’interféron contenant des répétitions tétratricopeptidiques 3 (IFIT3) est le produit d’un gène stimulé par l’interféron qui participe à la défense antivirale innée en aval de la signalisation des interférons de type I/III et des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR). IFIT3 forme des complexes avec d’autres membres de la famille IFIT et module la détection de l’ARN, le contrôle de la traduction et l’amplification des réponses à l’interféron pilotées par JAK–STAT, influençant l’expression de programmes effecteurs antiviraux plus larges. Par ces activités, IFIT3 contribue à la restriction cellulaire de la réplication virale et façonne des réseaux de signalisation inflammatoire tels que NF-κB et la transcription dépendante des IRF. Une expression dérégulée d’IFIT3 a été associée à une modification de la réactivité antivirale et à des états inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques en biologie des infections, en immunologie et dans la signalisation de l’interféron liée au cancer.

IFIT3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IFIT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IFIT3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IFIT3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IFIT3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.