Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFI-44L: sc-406752-ACT

IFI44L (interferon induced protein 44 like) code IFI-44L, un produit d’un gène stimulé par l’interféron, rapidement induit en aval de l’interféron de type I et de la signalisation JAK/STAT lors des réponses antivirales innées. L’expression d’IFI-44L est couramment utilisée comme marqueur moléculaire de l’activation de la voie de l’interféron et est associée à des programmes transcriptionnels qui façonnent les réponses cellulaires à l’infection virale et aux signaux inflammatoires. Une dérégulation de l’expression d’IFI44L ainsi que de la méthylation de son promoteur a été rapportée dans diverses affections liées à l’interféron, notamment des signatures de maladies auto-immunes systémiques et des états d’activation immunitaire liés aux infections. Ces caractéristiques font d’IFI44L une cible utile pour étudier les réseaux de gènes induits par l’interféron, l’activation des cellules immunitaires et la biologie des réponses hôte–pathogène.

IFI-44L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFI44L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFI-44L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFI44L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFI44L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFI-44L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFI44L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFI-44L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFI-44L dans les cellules tumorales présentant une expression de IFI44L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.