Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IDO Double Nickase Plasmid (h): sc-400495-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IDO Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IDO Double-Nickase-Plasmid (h) und IDO Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IDO1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IDO: sc-53978
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IDO Double Nickase Plasmid (h) | sc-400495-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IDO Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400495-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes IDO1 kodiert die Indolamin-2,3-Dioxygenase (IDO), ein hämabhängiges Enzym, das den ersten und geschwindigkeitsbestimmenden Schritt des Tryptophanabbaus im Kynurenin-Stoffwechselweg katalysiert. Durch die Absenkung lokaler Tryptophanspiegel und die Bildung immunmodulatorischer Kynurenin-Metabolite prägt IDO1 die Immunhomöostase, beeinflusst die Funktion von T‑Zellen und antigenpräsentierenden Zellen und greift in entzündliche Signalnetzwerke ein. Die IDO1-Aktivität wurde mit Immunflucht- und Toleranzprogrammen in unterschiedlichen pathologischen Kontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebs, chronische Infektionen und autoimmunassoziierte Entzündungen. Als metabolischer Checkpoint wird IDO1 häufig im Hinblick auf seine Rollen in der Redox-Balance, in Stressantworten und im Crosstalk zwischen Stoffwechsel und Immunregulation untersucht.
IDO Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IDO1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IDO1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IDO1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IDO1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.