Plasmide Double Nickase (h) IDH2: sc-401417-NIC

IDH2 code pour l’isocitrate déshydrogénase mitochondriale dépendante du NADP, qui catalyse la décarboxylation oxydative de l’isocitrate en α-cétoglutarate tout en produisant du NADPH. Cette réaction soutient le cycle de l’acide tricarboxylique, l’homéostasie rédox mitochondriale et les défenses antioxydantes en maintenant les voies du glutathion et de la thioredoxine dépendantes du NADPH. L’activité d’IDH2 influence les programmes de différenciation cellulaire et l’adaptation métabolique en conditions de stress oxydant, et une dysrégulation de la fonction d’IDH2 est liée à une altération du métabolisme de l’α-cétoglutarate et de la régulation épigénétique. Des mutations récurrentes d’IDH2, qui génèrent l’oncométabolite 2‑hydroxyglutarate, sont associées à des profils aberrants de méthylation de l’ADN et des histones, faisant d’IDH2 un nœud central dans les études sur le métabolisme du cancer et la signalisation mitochondriale.

IDH2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IDH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IDH2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IDH2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IDH2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.