Plasmide CRISPR d'Activation (h) ICK: sc-406371-ACT

La kinase des cellules intestinales (ICK) est une protéine kinase sérine/thréonine qui se localise aux cils primaires et au noyau, où elle régule la progression du cycle cellulaire, la ciliogenèse et des processus dépendants des microtubules. Dans les cellules humaines, ICK contribue à des réseaux de signalisation liés à la fonction ciliaire et à la mise en place des patrons de développement, notamment à des voies qui recoupent la transduction du signal Hedgehog et la dynamique du centrosome. Une perturbation de l’activité ou de l’expression d’ICK est associée à des phénotypes liés aux ciliopathies et à des troubles du développement, ce qui concorde avec son rôle dans la coordination de la prolifération avec la signalisation médiée par les cils. ICK est également étudiée dans des contextes où des altérations de la signalisation des kinases et du contrôle ciliaire influencent les états de différenciation et la fitness cellulaire.

ICK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ICK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ICK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ICK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ICK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ICK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ICK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ICK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ICK dans les cellules tumorales présentant une expression de ICK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.