Particules Lentivirales d'Activation (h) ICAM-1/CD54: sc-400098-LAC

La molécule d’adhérence intercellulaire 1 (ICAM1), également appelée ICAM-1/CD54, est une glycoprotéine de surface cellulaire de la superfamille des immunoglobulines qui assure une adhérence ferme des leucocytes et leur transmigration en se liant à des intégrines telles que LFA-1 (ITGAL/ITGB2) et Mac-1 (ITGAM/ITGB2). Son expression est fortement induite par les cytokines inflammatoires et la signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR), intégrant des signaux issus des voies NF-κB et MAPK pour réguler l’activation endothéliale et le trafic des cellules immunitaires. ICAM-1 participe également au remodelage du cytosquelette et à une signalisation « outside-in » pouvant influencer la fonction de barrière et les interactions cellule–cellule. Une expression dérégulée d’ICAM1 est associée à l’inflammation chronique, aux pathologies vasculaires, à des phénotypes auto-immuns et à la dynamique du microenvironnement immunitaire associé aux tumeurs, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de l’inflammation et de la biologie de l’adhérence.

Les particules d'activation lentivirales ICAM-1/CD54 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ICAM1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ICAM-1/CD54 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ICAM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ICAM-1/CD54. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ICAM1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.