Plasmide Double Nickase (h) ICAM-1/CD54: sc-400098-NIC

ICAM1 code pour la molécule d’adhérence intercellulaire 1 (ICAM‑1/CD54), un récepteur inductible de la superfamille des immunoglobulines exprimé par les cellules endothéliales et par plusieurs sous-populations de leucocytes, qui favorise l’adhérence ferme et la transmigration des cellules immunitaires. ICAM‑1 se lie à des intégrines telles que LFA‑1 (ITGAL/ITGB2) et MAC‑1 (ITGAM/ITGB2), reliant des programmes d’activation induits par les cytokines à l’arrêt des leucocytes, à la diapédèse et à la stabilité de la synapse immunologique. Son expression est fortement régulée par les signaux inflammatoires, notamment via les voies NF‑κB et MAPK en aval du TNF‑α, de l’IL‑1 et des récepteurs de reconnaissance des motifs, et contribue à l’activation endothéliale et à l’infiltration immunitaire des tissus. Une dérégulation d’ICAM1 est associée aux états inflammatoires chroniques, à l’inflammation vasculaire et aux interactions tumeur–système immunitaire, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un nœud mécanistique important pour l’étude du trafic leucocytaire et des microenvironnements inflammatoires.

ICAM-1/CD54 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ICAM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ICAM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ICAM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ICAM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.