Plasmide CRISPR d'Activation (h) ICAM-1/CD54: sc-400098-ACT

ICAM1 code la molécule d’adhérence intercellulaire 1 (ICAM‑1/CD54), un récepteur inductible de la superfamille des immunoglobulines exprimé par les cellules endothéliales et épithéliales ainsi que par de nombreux leucocytes. ICAM‑1 se lie aux intégrines β2 telles que LFA‑1 (ITGAL/ITGB2) et Mac‑1 (ITGAM/ITGB2) pour assurer l’adhérence ferme, la migration transendothéliale et la formation de synapses immunologiques. Son expression est fortement augmentée par des signaux inflammatoires, notamment le TNF‑α et l’IL‑1, via des programmes dépendants de NF‑κB et des MAPK, reliant ICAM1 au trafic leucocytaire et à l’inflammation vasculaire. Une activité et une expression dérégulées d’ICAM1 sont associées à des états inflammatoires chroniques, à des pathologies auto-immunes, aux processus athéroscléreux et aux interactions tumeur–système immunitaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier l’adhérence cellulaire et la signalisation induite par les cytokines.

ICAM-1/CD54 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ICAM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ICAM-1/CD54 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ICAM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ICAM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ICAM-1/CD54. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ICAM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ICAM-1/CD54 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ICAM-1/CD54 dans les cellules tumorales présentant une expression de ICAM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.