I1PP2A Double Nickase Plasmid (h): sc-402988-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ANP32A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ANP32A Double-Nickase-Plasmid (h) und ANP32A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ANP32A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ANP32A: sc-100767
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
I1PP2A Double Nickase Plasmid (h) | sc-402988-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ANP32A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402988-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANP32A kodiert I1PP2A, ein saures, leucinreiches nukleäres Phosphoprotein, das als Inhibitor der Proteinphosphatase 2A (PP2A) und als Regulator chromatinassoziierter Prozesse fungiert. Durch die Modulation PP2A-abhängiger Dephosphorylierungsereignisse beeinflusst I1PP2A den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten sowie Signalnetzwerke, die die transkriptionelle Kontrolle mit der zellulären Anpassung an Stress verknüpfen. ANP32A ist zudem an der mRNA-Metabolisierung und der nukleozytoplasmatischen Dynamik beteiligt, unter anderem durch Interaktionen mit RNA-bindenden Faktoren und Chromatin-Remodeling-Komponenten. Eine dysregulierte ANP32A/I1PP2A-Aktivität wurde in der Literatur mit veränderten Proliferations- und Überlebensphänotypen in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für Studien zu onkogenem Signaling und neurodegenerativen Signalwegen unterstreicht.
ANP32A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ANP32A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ANP32A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ANP32A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ANP32A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.