Plasmide CRISPR d'Activation (h) I1PP2A: sc-402988-ACT

ANP32A code I1PP2A, une phosphoprotéine nucléaire acide riche en leucines qui agit comme inhibiteur de la protéine phosphatase 2A (PP2A), modulant ainsi les voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation et des processus associés à la chromatine. En régulant l’activité de PP2A, I1PP2A influence la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, les programmes transcriptionnels et les réseaux de signalisation d’adaptation au stress. ANP32A a été impliquée dans la régulation de l’apoptose et des réponses immunitaires innées, et fait fréquemment l’objet d’études dans des contextes où un contrôle anormal des phosphatases perturbe l’homéostasie cellulaire. Une expression ou une fonction dérégulée d’ANP32A/I1PP2A a été associée à la biologie tumorale, à des mécanismes neurodégénératifs et à la signalisation inflammatoire, ce qui souligne sa pertinence dans des modèles de maladies centrés sur des voies.

ANP32A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANP32A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANP32A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANP32A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANP32A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANP32A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANP32A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANP32A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANP32A dans les cellules tumorales présentant une expression de ANP32A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.