I1PP2A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402988-ACT

ANP32A kodiert I1PP2A, ein saures, leucinreiches nukleäres Phosphoprotein, das als Inhibitor der Proteinphosphatase 2A (PP2A) wirkt und dadurch phosphorylierungsabhängige Signalwege sowie chromatinassoziierte Prozesse mitprägt. Durch die Modulation der PP2A-Aktivität beeinflusst I1PP2A die Progression des Zellzyklus, DNA-Schadensantworten, Transkriptionsprogramme und stressadaptive Signalnetzwerke. ANP32A wird zudem mit der Regulation von Apoptose und angeborenen Immunantworten in Verbindung gebracht und häufig in Kontexten untersucht, in denen eine gestörte Phosphatasekontrolle die zelluläre Homöostase verändert. Eine dysregulierte Expression oder Funktion von ANP32A/I1PP2A wurde mit Tumorbiologie, neurodegenerativen Mechanismen und inflammatorischer Signalübertragung assoziiert, was seine Relevanz für pathozentrierte Krankheitsmodelle auf Signalwegebene unterstreicht.

ANP32A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANP32A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ANP32A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANP32A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANP32A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ANP32A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANP32A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ANP32A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ANP32A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANP32A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.