Plasmide Double Nickase (h) HYPE: sc-406626-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HYPE correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HYPE Double Nickase (h) et le plasmide HYPE Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FICD. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HYPE Antibody (G-7): sc-515368
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HYPE | sc-406626-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HYPE | sc-406626-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FICD code pour HYPE, une enzyme à domaine Fic associée au réticulum endoplasmique, qui catalyse l’AMPylation et la dé-AMPylation de protéines cibles, en particulier la chaperonne HSPA5/GRP78. En modulant l’activité de GRP78, HYPE influence la protéostasie, la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et l’adaptation au stress du RE, en s’intégrant aux voies qui coordonnent le repliement des protéines et le contrôle qualité. Une homéostasie du RE et une signalisation de stress dérégulées, liées à l’activité de FICD/HYPE, ont été associées à une vulnérabilité cellulaire dans des contextes tels que la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques et la biologie des cancers, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation sensibles au stress.
HYPE Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FICD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FICD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FICD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FICD.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.