HYPB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402789

Descripción general

SETD2, también conocido como HYPB, codifica la principal metiltransferasa de histonas responsable de la trimetilación de la lisina 36 de la histona H3 (H3K36me3) a lo largo de los cuerpos génicos transcritos activamente. Esta modificación coordina la elongación transcripcional con el procesamiento cotranscripcional del ARN, la organización de la cromatina y el reclutamiento de la maquinaria de reparación del ADN, vinculando la actividad de SETD2 con el mantenimiento de la estabilidad del genoma. La H3K36me3 dependiente de SETD2 también ayuda a determinar la elección de la vía de reparación durante la recombinación homóloga y favorece una dinámica adecuada de la horquilla de replicación. La alteración de la función de SETD2 y la disrupción de los patrones de metilación de H3K36 se estudian con frecuencia en el contexto de la desregulación epigenética oncogénica, el estrés transcripcional y los defectos en la respuesta al daño del ADN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HYPB (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SETD2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SETD2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SETD2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HYPB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SETD2 para la investigación de la señalización de HYPB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SETD2 críticos para la función de HYPB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SETD2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HYPB CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HYPB CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SETD2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HYPB (h) y el plásmido HDR HYPB (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SETD2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SETD2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.