Particules Lentivirales d'Activation (m) HXK II: sc-420866-LAC

Le gène murin **Hk2** code l’hexokinase II (HXK II), une enzyme associée aux mitochondries qui catalyse la première étape engagée de la glycolyse en phosphorylant le glucose en glucose‑6‑phosphate, reliant ainsi l’entrée du glucose au flux glycolytique et aux voies biosynthétiques en aval. HXK II intègre la signalisation métabolique à la survie cellulaire en s’associant à la membrane mitochondriale externe et en influençant l’utilisation de l’ATP, l’équilibre rédox et la sensibilité à l’apoptose. L’activité de Hk2 interfère avec la signalisation insuline/PI3K–AKT, les réponses à l’hypoxie et les réseaux de détection des nutriments qui coordonnent la glycolyse, la voie des pentoses phosphates et les apports anaplérotiques au cycle de l’ATC. Une expression ou une localisation dérégulée de HXK II est fréquemment étudiée dans des modèles de reprogrammation métabolique, d’inflammation et de phénotypes glycolytiques associés aux tumeurs, ce qui souligne sa pertinence pour des recherches mécanistiques orientées vers les maladies.

Les particules d'activation lentivirales HXK II (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Hk2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HXK II (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Hk2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HXK II. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Hk2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.