Plásmido Doble Nickase (h) HXK I: sc-401753-NIC

El gen humano **HK1** codifica la **hexoquinasa I (HXK I)**, una enzima asociada a la membrana externa mitocondrial que cataliza la fosforilación de la glucosa a **glucosa-6-fosfato** dependiente de ATP, comprometiendo la glucosa con la **glucólisis** y favoreciendo su entrada en la **vía de las pentosas fosfato**. Al acoplar el uso de glucosa a la demanda energética celular y a la homeostasis redox, la HXK I influye en el flujo metabólico, la producción de **NADPH** y los precursores biosintéticos que moldean la proliferación y las respuestas al estrés. HK1 también participa en la fisiología mitocondrial mediante interacciones que pueden modular la señalización apoptótica y las vías de supervivencia celular. La expresión o regulación alteradas de HK1 se han vinculado a la reprogramación metabólica observada en diversos contextos relevantes para la enfermedad, incluida la neurodegeneración, la lesión isquémica y fenotipos glucolíticos asociados al cáncer, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del metabolismo de la glucosa.

HXK I El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HK1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.