Plasmide Double Nickase (m) Huntingtin: sc-420825-NIC

Le gène murin **Htt** code la huntingtine, une grande protéine d’échafaudage qui contribue à l’homéostasie neuronale grâce à des fonctions dans le trafic vésiculaire, l’endocytose et la dynamique du cytosquelette. La huntingtine participe à la régulation transcriptionnelle et aux réseaux de protéostasie, notamment l’autophagie et l’élimination dépendante de l’ubiquitine, et influence la fonction synaptique ainsi que le transport intracellulaire. Toute perturbation des niveaux ou de l’intégrité de la huntingtine affecte la physiologie des neurones striataux et corticaux et a été largement étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence et des phénotypes moléculaires associés à la maladie de Huntington. Dans les systèmes murins, **Htt** constitue un point d’entrée majeur pour disséquer les interactions entre le transport axonal, la fonction mitochondriale et la signalisation de réponse au stress.

Huntingtin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Htt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Htt. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Htt. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Htt.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.