Plasmide Double Nickase (h) Huntingtin: sc-401441-NIC

HTT code la huntingtine, une grande protéine cytosolique et nucléaire qui contribue à l’homéostasie neuronale par son rôle dans le trafic vésiculaire, la dynamique endosomale, la régulation transcriptionnelle et les voies autophagie–lysosome. La huntingtine interagit avec la machinerie de transport dépendante des microtubules et avec des réseaux de signalisation qui influencent la fonction synaptique, l’intégrité mitochondriale et les réponses au stress. L’expansion polyglutaminique au sein de la huntingtine perturbe la protéostasie et le transport cellulaire, entraînant une vulnérabilité sélective des neurones striataux et corticaux. Ces mécanismes liés à HTT sont largement utilisés pour modéliser des perturbations de voies associées à la neurodégénérescence, notamment l’altération de l’autophagie, l’atteinte du transport axonal et la dérégulation transcriptionnelle.

Huntingtin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HTT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HTT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HTT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HTT.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.