HuD Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400132-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HuDO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HuD (h) e o Plasmídeo Double Nickase HuD (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ELAVL4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HuD Anticorpo (H-9): sc-48421
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HuD Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400132-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HuD Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400132-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELAVL4 codifica HuD, uma proteína de ligação a RNA enriquecida em neurônios da família ELAV/Hu, que reconhece elementos ricos em AU para regular a estabilidade do mRNA, o splicing alternativo e a tradução. HuD coordena programas de controlo pós-transcricional da expressão génica que sustentam a diferenciação neuronal, o crescimento axonal, a plasticidade sináptica e a remodelação dependente da atividade, integrando-se com a dinâmica dos grânulos de stress e com o transporte de RNA em neuritos. A desregulação da função e da expressão de ELAVL4/HuD tem sido associada a alterações na maturação neuronal e no metabolismo do RNA em contextos neurodesenvolvimentais e neurodegenerativos, e ELAVL4 também é usado como marcador de linhagem neuronal na biologia de tumores cerebrais e em síndromes neurológicas paraneoplásicas. Estas características tornam ELAVL4 um ponto de referência útil para estudar regulões de RNA neuronais, a seleção de isoformas de transcritos e a reorganização de redes proteína–RNA.
HuD O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ELAVL4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ELAVL4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ELAVL4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ELAVL4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.