HuC Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400172-NIC

ELAVL3 (HuC) é uma proteína de ligação a RNA enriquecida em neurônios que reconhece elementos ricos em AU em transcritos-alvo e regula a expressão gênica pós-transcricional por meio do controle da estabilidade, localização e tradução do mRNA. Ela contribui para a diferenciação e manutenção neuronal ao moldar regulons de RNA ligados à função sináptica e à dinâmica do citoesqueleto, além de interagir com vias mais amplas de processamento de RNA, incluindo splicing alternativo e a biologia de grânulos de RNA responsivos ao estresse. Alterações na atividade de proteínas neuronais de ligação a RNA e nos programas transcriptômicos a jusante são frequentemente estudadas no contexto de mecanismos do neurodesenvolvimento e da neurodegeneração, nos quais a ELAVL3 serve como marcador e nó funcional na regulação gênica específica de neurônios. Em pesquisas com ELAVL3 humano, é comum investigar como o controle de RNA dependente de HuC influencia a maturação neuronal, a excitabilidade e a vulnerabilidade ao estresse celular.

HuC O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ELAVL3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ELAVL3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ELAVL3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ELAVL3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.