Plasmide CRISPR d'Activation (h) HuC: sc-400172-ACT

ELAVL3 (HuC) est une protéine de liaison à l’ARN enrichie dans les neurones, qui reconnaît des éléments riches en AU dans les transcrits cibles afin de réguler la stabilité des ARNm, l’épissage et la traduction, soutenant ainsi la différenciation et le maintien des neurones. En façonnant des programmes d’expression génique post-transcriptionnels, HuC contribue à la neurogenèse, à la croissance des neurites et à la fonction synaptique grâce à un contrôle coordonné du métabolisme de l’ARN. Une expression ou une localisation d’ELAVL3 dérégulée peut perturber l’homéostasie neuronale et a été étudiée dans le contexte de la biologie des maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives. En tant que marqueur des neurones post-mitotiques, HuC est fréquemment utilisé pour étudier l’engagement de lignée et les changements d’état neuronal dans des modèles cellulaires humains.

HuC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELAVL3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HuC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELAVL3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELAVL3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HuC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELAVL3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HuC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HuC dans les cellules tumorales présentant une expression de ELAVL3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.