HuB Plasmide Double Nickase (h): sc-400169-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HuB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HuB Double Nickase Plasmid (h) e il HuB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ELAVL2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HuB Plasmide Double Nickase (h) | sc-400169-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HuB Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400169-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELAVL2 (HuB) è una proteina legante l’RNA arricchita nei neuroni, appartenente alla famiglia Hu/ELAV, che riconosce elementi ricchi in AU nei trascritti bersaglio per regolare la stabilità dell’mRNA, lo splicing alternativo e la traduzione. Modellando programmi di espressione genica post-trascrizionali, HuB influenza la differenziazione neuronale, la guida assonale, la funzione sinaptica e la plasticità dipendente dall’attività, intersecando vie che controllano il processamento dell’RNA e la traduzione locale. Un’alterata espressione o funzione di ELAVL2 è stata collegata a cambiamenti nelle reti geniche neuronali osservati in contesti neuroevolutivi e neurodegenerativi, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi che collegano il metabolismo dell’RNA al fenotipo neuronale. La modulazione sperimentale di HuB offre uno strumento per indagare come le proteine leganti l’RNA coordinino la dinamica del trascrittoma in modelli neurali umani.
HuB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ELAVL2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ELAVL2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ELAVL2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ELAVL2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.