Plasmide Double Nickase (h) HuB: sc-400169-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HuB correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HuB Double Nickase (h) et le plasmide HuB Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ELAVL2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HuB | sc-400169-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HuB | sc-400169-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELAVL2 (HuB) est une protéine de liaison à l’ARN enrichie dans les neurones, appartenant à la famille Hu/ELAV, qui reconnaît des éléments riches en AU dans les transcrits cibles afin de réguler la stabilité des ARNm, l’épissage alternatif et la traduction. En façonnant des programmes d’expression génique post-transcriptionnels, HuB influence la différenciation neuronale, le guidage axonal, la fonction synaptique et la plasticité dépendante de l’activité, en s’articulant avec des voies contrôlant le traitement de l’ARN et la traduction locale. Une expression ou une fonction dérégulée d’ELAVL2 a été associée à des altérations des réseaux géniques neuronaux observées dans des contextes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes couplant le métabolisme de l’ARN au phénotype neuronal. La modulation expérimentale de HuB constitue un levier pour analyser comment les protéines de liaison à l’ARN coordonnent la dynamique du transcriptome dans des modèles neuronaux humains.
HuB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELAVL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELAVL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELAVL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELAVL2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.