Plasmide CRISPR d'Activation (h) HtrA2: sc-402576-ACT

HTRA2 code la protéase sérine mitochondriale humaine HtrA2 (également appelée OMI), un facteur de contrôle qualité sensible au stress qui contribue au maintien de la protéostasie mitochondriale. En cas de dysfonctionnement mitochondrial, HtrA2 participe à la surveillance des protéines et peut influencer la signalisation apoptotique en modulant l’activité des caspases et en interagissant avec les protéines inhibitrices de l’apoptose, reliant ainsi l’intégrité mitochondriale aux décisions de destinée cellulaire. L’activité de HTRA2 est liée aux réponses au stress oxydatif, à la dynamique mitochondriale et aux voies de stress protéotoxique qui façonnent l’homéostasie neuronale et métabolique. La dérégulation de HTRA2 a été associée à des pathologies mitochondriales et a été étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence et d’autres troubles caractérisés par une altération de la fonction mitochondriale et une apoptose modifiée.

HtrA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HTRA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HtrA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HTRA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HTRA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HtrA2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HTRA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HtrA2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HtrA2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HTRA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.