Plasmide CRISPR d'Activation (h) HTF9C: sc-407594-ACT

Le gène humain TRMT2A code HTF9C, une méthyltransférase des ARNt impliquée dans la modification post‑transcriptionnelle des ARN via la formation de 5‑méthyluridine à des positions définies sur les ARNt. En modulant la stabilité des ARNt et la fidélité du décodage, TRMT2A favorise une traduction efficace et la protéostasie, des processus qui influencent la progression du cycle cellulaire et l’adaptation au stress. La perturbation des réseaux de modification des ARNt a été associée à des altérations du contrôle traductionnel et des programmes de maintenance du génome, ce qui rend TRMT2A/HTF9C pertinent pour l’étude de la signalisation proliférative et de l’homéostasie cellulaire. Les variations d’expression et de fonction des enzymes modifiant les ARNt sont fréquemment examinées en biologie du cancer et en neurobiologie comme facteurs contribuant à une dérégulation de l’expression génique au niveau de la traduction.

HTF9C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRMT2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HTF9C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRMT2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRMT2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HTF9C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRMT2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HTF9C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HTF9C dans les cellules tumorales présentant une expression de TRMT2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.