HSPA5/BiP/GRP78 Double Nickase Plasmid (h): sc-400073-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSPA5/BiP/GRP78 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSPA5/BiP/GRP78 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSPA5/BiP/GRP78 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSPA5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSPA5/BiP/GRP78: sc-13539
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSPA5/BiP/GRP78 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400073-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSPA5/BiP/GRP78 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400073-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA5 kodiert das im ER lokalisierte Chaperon BiP/GRP78 (HSPA5), einen zentralen Regulator der Proteostase, der an neu entstehende Polypeptide bindet, Aggregation verhindert und die Faltung sowie Assemblierung sekretorischer und membranständiger Proteine unterstützt. Als zentraler Sensor und Effektor der Unfolded-Protein-Response (UPR) moduliert HSPA5 die ER-Stress-Signalübertragung über die PERK–EIF2α-, IRE1–XBP1- und ATF6-Signalwege und beeinflusst damit Translation, Qualitätskontrolle und adaptive Transkriptionsprogramme. Zudem ist HSPA5 an der ER-assoziierten Degradation (ERAD) und der Calcium-Homöostase beteiligt und koppelt die Faltungskapazität an den Redox- und Stoffwechselzustand. Eine dysregulierte HSPA5-Aktivität ist mit Erkrankungen verbunden, die durch chronischen proteotoxischen Stress gekennzeichnet sind, darunter Tumorbiologie, Neurodegeneration, Stoffwechselstörungen und entzündliche Zustände, was HSPA5 zu einem wichtigen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Stressadaptation macht.
HSPA5/BiP/GRP78 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSPA5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSPA5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSPA5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSPA5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.