Plasmide CRISPR d'Activation (h) HSP 90α: sc-400088-ACT

HSP90AA1 code la protéine humaine de choc thermique HSP90α (HSP 90α), une chaperonne moléculaire abondante, dépendante de l’ATP, qui stabilise et replie un large éventail de protéines clientes, notamment des kinases, des récepteurs aux hormones stéroïdes et des facteurs de transcription. HSP90α contribue à la protéostasie et à l’adaptation cellulaire au stress grâce à sa coordination avec des co‑chaperonnes, à la régulation de la maturation des protéines et à la mise en tampon des protéines mal repliées lors d’un choc thermique et d’autres facteurs de stress. Via son réseau de protéines clientes, HSP90α s’interface avec des voies de signalisation telles que MAPK et PI3K–AKT, ainsi qu’avec des processus de contrôle du cycle cellulaire et de réponse aux dommages de l’ADN. Une expression dérégulée de HSP90AA1 ou une dépendance accrue à cette protéine est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la reprogrammation de la signalisation des cellules tumorales, l’agrégation protéique dans les maladies neurodégénératives et les réponses au stress inflammatoire, ce qui en fait un nœud central pour la recherche mécanistique sur les voies biologiques.

HSP 90α Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSP90AA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HSP 90α Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSP90AA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSP90AA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HSP 90α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSP90AA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HSP 90α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HSP 90α dans les cellules tumorales présentant une expression de HSP90AA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.