HSP 78 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413434

Descripción general

CLPB codifica la chaperona mitocondrial humana AAA+ HSP78, una proteína desagregasa que coopera con los sistemas mitocondriales HSP70/HSP60 para extraer y volver a plegar proteínas mal plegadas o agregadas en la matriz. Mediante la remodelación dependiente de ATP de complejos proteicos, CLPB respalda la proteostasis mitocondrial, la integridad de la cadena respiratoria y la adaptación celular al estrés proteotóxico y oxidativo. La disfunción asociada a CLPB se ha relacionado con fenotipos de enfermedades mitocondriales y con una homeostasis metabólica alterada, lo que subraya su relevancia en las vías que controlan la producción de energía, las respuestas al estrés y el control de calidad. Como nodo de la vigilancia proteica mitocondrial, HSP78 se estudia con frecuencia en contextos que implican fosforilación oxidativa alterada, desequilibrio redox y señalización de apoptosis inducida por estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HSP 78 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLPB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLPB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLPB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HSP 78.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLPB para la investigación de la señalización de HSP 78, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CLPB críticos para la función de HSP 78
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLPB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HSP 78 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HSP 78 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLPB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HSP 78 (h) y el plásmido HDR HSP 78 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLPB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLPB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.