Plasmide CRISPR/Cas9 KO HSP 78 (h): sc-413434

Présentation

CLPB code la chaperonne mitochondriale humaine AAA+ HSP78, une désagrégase protéique qui coopère avec les systèmes mitochondriaux HSP70/HSP60 pour extraire et refaçonner des protéines mal repliées ou agrégées dans la matrice. Par le remodelage ATP-dépendant de complexes protéiques, CLPB soutient la protéostasie mitochondriale, l’intégrité de la chaîne respiratoire et l’adaptation cellulaire au stress protéotoxique et oxydatif. Le dysfonctionnement lié à CLPB a été associé à des phénotypes de maladies mitochondriales et à une homéostasie métabolique altérée, soulignant sa pertinence pour les voies qui contrôlent la production d’énergie, les réponses au stress et le contrôle qualité. En tant que nœud de la surveillance des protéines mitochondriales, HSP78 est fréquemment étudiée dans des contextes impliquant une phosphorylation oxydative déficiente, un déséquilibre rédox et une signalisation apoptotique induite par le stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HSP 78 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLPB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLPB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLPB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HSP 78.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLPB pour l'étude de la signalisation de HSP 78, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLPB essentiels à la fonction de HSP 78
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLPB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HSP 78 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HSP 78 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLPB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HSP 78 plasmide HDR (h) et le HSP 78 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLPB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLPB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.