Plasmide Double Nickase (h) HSP 60: sc-400336-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HSP 60 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HSP 60 Double Nickase (h) et le plasmide HSP 60 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSPD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HSP 60 Antibody (LK1): sc-59567
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HSP 60 | sc-400336-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HSP 60 | sc-400336-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPD1 code la chaperonine mitochondriale HSP60 (HSPD1), un composant central du système de chaperonines qui assure le repliement et l’assemblage, dépendants de l’ATP, des protéines importées dans la mitochondrie. En maintenant la protéostasie dans la matrice mitochondriale, HSP60 influence la phosphorylation oxydative, la biogenèse mitochondriale et les réponses cellulaires au stress, et peut moduler la signalisation de la réponse mitochondriale aux protéines mal repliées (UPRmt). Une perturbation de HSPD1 affecte le métabolisme mitochondrial, la gestion des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et des voies liées à l’apoptose, reliant ainsi une fonction ou une expression altérée de HSP60 à la neurodégénérescence, à des phénotypes inflammatoires et au remodelage métabolique associé au cancer. En tant que chaperonne hautement conservée, HSP60 est également pertinente pour l’étude du contrôle qualité mitochondrial et du stress protéotoxique dans une grande diversité de contextes expérimentaux.
HSP 60 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.