HSP 40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402810

Übersicht

DNAJB1 kodiert das menschliche HSP40-Co-Chaperon (DnaJ-Homolog, Unterfamilie B, Mitglied 1), einen zentralen Regulator der Proteostase, der die ATPase-Aktivität von HSP70 stimuliert und so das Falten, Wiederfalten und die Sortierung fehlgefalteter Client-Proteine fördert. Über seine J-Domänen-abhängige Interaktion mit HSP70 unterstützt HSP40 die zytosolische Proteinkontrolle, Stressantworten sowie die Koordination der chaperon-unterstützten Degradation über das Proteasom und autophagie-gekoppelte Signalwege. Die Funktion von DNAJB1 ist für die zelluläre Widerstandsfähigkeit bei Hitzeschock und anderen proteotoxischen Belastungen relevant; veränderte Chaperon-Netzwerke werden zudem häufig mit Proteinaggregations-Erkrankungen und der Anpassung an onkogenen Stress in Verbindung gebracht. Ein wiederkehrendes, krankheitsassoziiertes Ereignis im Zusammenhang mit DNAJB1 ist die in fibrolamellärem Karzinom beobachtete DNAJB1–PRKACA-Fusion, was den Wert DNAJB1-fokussierter Modelle zur Untersuchung der Chaperon-Biologie in definierten genetischen Kontexten unterstreicht.

Das HSP 40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DNAJB1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DNAJB1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DNAJB1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HSP 40-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DNAJB1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HSP 40-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DNAJB1-Exone abzielen, die für die HSP 40-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DNAJB1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HSP 40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HSP 40 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DNAJB1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HSP 40 HDR-Plasmid (h) und HSP 40 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DNAJB1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DNAJB1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.