Plasmide Double Nickase (h) HSF4: sc-403850-NIC

HSF4 (facteur de transcription 4 de choc thermique) est un facteur de transcription se liant à l’ADN qui coordonne la protéostase en régulant les protéines de choc thermique et d’autres gènes sensibles au stress, avec des rôles marqués dans les programmes de différenciation cellulaire. Dans les tissus oculaires, HSF4 contribue à la maturation des cellules fibreuses du cristallin et au maintien de l’homéostasie protéique, des processus étroitement liés à l’organisation du cytosquelette, aux réseaux de chaperonnes et à la protection contre l’agrégation des protéines. Une activité dérégulée de HSF4 a été associée à des opacités héréditaires du cristallin et à des phénotypes liés à la cataracte, reflétant la sensibilité du cristallin aux perturbations du contrôle qualité des protéines. En tant que nœud des circuits transcriptionnels de réponse au stress, HSF4 est étudié pour ses effets sur les transitions d’état cellulaire, la régulation transcriptionnelle en conditions de stress protéotoxique et les profils d’expression des chaperonnes en aval.

HSF4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSF4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSF4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSF4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.