Plasmide CRISPR d'Activation (h) HSF4: sc-403850-ACT

HSF4 humain (heat shock transcription factor 4) est un facteur de transcription se liant à l’ADN qui régule des programmes d’expression génique sensibles au stress, notamment ceux des chaperons moléculaires et des composants de la protéostase qui assurent le repliement des protéines et l’homéostasie cellulaire. À la différence des HSF classiques inductibles par la chaleur, HSF4 contribue au contrôle transcriptionnel associé au développement et à la différenciation, avec des rôles majeurs dans la biologie du cristallin et le maintien de sa transparence. En modulant des promoteurs contenant des éléments de réponse au choc thermique (HSE), HSF4 s’inscrit à l’interface des réponses au stress protéotoxique, du contrôle qualité des protéines et des transitions d’état cellulaire. Une activité HSF4 dérégulée et certaines variantes ont été associées à des anomalies du cristallin et à des phénotypes liés à la cataracte, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’agrégation protéique, de la différenciation épithéliale et des réseaux transcriptionnels spécifiques des tissus.

HSF4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSF4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HSF4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSF4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSF4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HSF4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSF4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HSF4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HSF4 dans les cellules tumorales présentant une expression de HSF4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.