Plasmide Double Nickase (h) HSF2: sc-402400-NIC

HSF2 (heat shock factor 2) est un facteur de transcription spécifique de séquence qui coordonne l’expression génique en réponse au stress et contribue à la protéostasie en régulant les protéines de choc thermique et les réseaux de chaperons moléculaires. Au-delà de la signalisation classique du choc thermique, HSF2 participe à des programmes de développement et de différenciation, notamment dans les voies neuronales et germinales, et interagit avec le remodelage de la chromatine pour façonner des réponses transcriptionnelles dépendantes des stimuli. L’activité de HSF2 peut moduler la progression du cycle cellulaire, la susceptibilité à l’apoptose et les réponses au stress protéotoxique, l’inscrivant ainsi dans des voies pertinentes pour la neurodégénérescence, la biologie du cancer et les troubles caractérisés par une homéostasie protéique altérée. Des programmes transcriptionnels dépendants de HSF2 dérégulés ont été rapportés dans de multiples contextes liés aux maladies, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier l’adaptation au stress et la régulation transcriptionnelle dans les cellules humaines.

HSF2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSF2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSF2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSF2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.