Plasmide CRISPR/Cas9 KO HS6ST2 (h): sc-407513

Présentation

HS6ST2 code l’héparane sulfate 6-O-sulfotransférase 2, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la 6‑O‑sulfatation des résidus de glucosamine au cours de la biosynthèse des protéoglycanes à héparane sulfate. Cette modification façonne les profils de sulfatation de l’héparane sulfate qui régulent la liaison des ligands et les fonctions de co‑récepteur, influençant des voies de signalisation telles que FGF, VEGF, WNT, BMP, ainsi que des signaux médiés par les chimiokines. En modulant les interactions des glycosaminoglycanes de la matrice extracellulaire et de la surface cellulaire, HS6ST2 contribue à l’adhésion cellulaire, à la migration et à l’organisation des patrons de développement. Des altérations de la sulfatation de l’héparane sulfate ont été associées à une dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui motive l’étude de HS6ST2 en biologie du cancer et dans d’autres troubles liés à une signalisation dépendante de la matrice extracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HS6ST2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HS6ST2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HS6ST2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HS6ST2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HS6ST2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HS6ST2 pour l'étude de la signalisation de HS6ST2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HS6ST2 essentiels à la fonction de HS6ST2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HS6ST2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HS6ST2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HS6ST2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HS6ST2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HS6ST2 plasmide HDR (h) et le HS6ST2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HS6ST2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HS6ST2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.