Plasmide Double Nickase (h) Hrs: sc-401501-NIC

Le gène humain **HGS** code le substrat de la tyrosine kinase régulée par le facteur de croissance des hépatocytes (Hrs), un composant d’ESCRT-0 qui initie le tri endosomal des protéines membranaires ubiquitinylées. Hrs se lie au phosphatidylinositol-3-phosphate sur les endosomes précoces et coordonne la reconnaissance des cargos avec les complexes ESCRT-I/II/III afin de favoriser la formation de corps multivésiculaires, la dégradation lysosomale et l’atténuation de la signalisation des récepteurs. Par ces activités, Hrs influence le contrôle, dépendant de l’endocytose, de voies telles qu’EGFR et d’autres réseaux de récepteurs à activité tyrosine kinase, affectant la durée du signal et l’homéostasie cellulaire. Un trafic endosomal et un renouvellement des récepteurs dérégulés, associés à une altération de la fonction de HGS/Hrs, ont été mis en lien avec des contextes pertinents pour la biologie des cancers et les mécanismes des maladies neurodégénératives, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la protéostase et l’adaptation de la signalisation.

Hrs Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HGS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HGS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HGS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HGS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.