Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HRI Double Nickase Plasmid (m): sc-420950-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HRI Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HRI Double-Nickase-Plasmid (m) und HRI Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Eif2ak1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HRI: sc-365239
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HRI Double Nickase Plasmid (m) | sc-420950-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HRI Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420950-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Eif2ak1** kodiert den **hämregulierten Inhibitor (HRI)**, eine stressresponsive eIF2α-Kinase, die die globale Translation abschwächt, indem sie **EIF2S1** bei Häm-Mangel, oxidativem Stress und proteotoxischem Stress phosphoryliert. HRI ist ein zentraler Bestandteil der integrierten Stressantwort (ISR) und koordiniert die translatorische Reprogrammierung sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme wie die **ATF4**-gesteuerte Adaptation zur Wiederherstellung der Proteostase und des Redoxgleichgewichts. In erythroiden Zellen hilft HRI dabei, die Hämverfügbarkeit an die Globinsynthese zu koppeln und die Reifung während der Hämatopoese zu unterstützen; in breiteren Kontexten verknüpft es Stresserkennung mit Ribosomenfunktion und Proteinkontrolle. Dysregulierte ISR-Signalgebung und eine abweichende translatorische Kontrolle unter Beteiligung von HRI wurden mit anämiebezogenen Phänotypen und Stress-Fehlanpassung in Modellen in Verbindung gebracht, die für entzündliche und neurodegenerative Prozesse relevant sind.
HRI Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Eif2ak1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Eif2ak1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Eif2ak1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Eif2ak1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.