Plasmide Double Nickase (m) HRC: sc-420947-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) HRC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HRC Double Nickase (m) et le plasmide HRC Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Hrc. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) HRC | sc-420947-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) HRC | sc-420947-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Hrc** code la protéine de liaison au calcium riche en histidine (HRC), un composant luminal du réticulum sarcoplasmique qui module les dynamiques de stockage et de libération du calcium dans le muscle strié. HRC interagit avec des éléments clés de la machinerie du couplage excitation–contraction, notamment la recapture du Ca2+ par la SERCA et la libération de Ca2+ dépendante du récepteur à la ryanodine, influençant ainsi les transitoires cytosoliques de Ca2+ et la signalisation en aval. Par son rôle dans l’homéostasie du calcium, HRC est liée à des voies qui régulent la contractilité des myocytes, les réponses au stress et des programmes transcriptionnels dépendants du Ca2+. Une dérégulation de la fonction de HRC a été associée à des altérations de la physiologie cardiaque et du muscle squelettique, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de l’arythmogénèse et de phénotypes cellulaires pertinents pour les cardiomyopathies.
HRC Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hrc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hrc. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hrc. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hrc.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.