Plásmido CRISPR de Activación (m) HRC: sc-420947-ACT

El gen Hrc de ratón codifica la proteína de unión al calcio rica en histidina (HRC), un componente luminal del retículo sarcoplásmico que modula el almacenamiento y la liberación de Ca²⁺ al influir en la actividad del receptor de rianodina y en la recaptación dependiente de SERCA. Al moldear el acoplamiento excitación–contracción y la homeostasis intracelular del calcio, HRC contribuye a la función de los cardiomiocitos y del músculo esquelético, donde un ciclo preciso de Ca²⁺ regula la contractilidad y las respuestas al estrés. La expresión desregulada de Hrc o las alteraciones en el manejo de Ca²⁺ se estudian con frecuencia en el contexto del remodelado cardíaco, mecanismos arritmogénicos y fenotipos asociados a miopatías. Como regulador nodal de la dinámica del calcio en el retículo sarcoplásmico, HRC es relevante para vías que controlan la señalización del calcio, la proteostasis y la adaptación muscular a estímulos fisiológicos y patológicos.

HRC El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hrc sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HRC El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hrc en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hrc, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HRC. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hrc y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HRC en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HRC en células tumorales con expresión de Hrc silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.