Plasmide CRISPR d'Activation (h) HP1γ: sc-417205-ACT

CBX3 code la protéine 1 gamma de l’hétérochromatine (HP1γ), un facteur associé à la chromatine qui se lie à la méthylation de la lysine 9 de l’histone H3 et contribue à l’organisation de la structure de la chromatine à un niveau supérieur. HP1γ participe à la formation de l’hétérochromatine, à la régulation transcriptionnelle, à la réplication de l’ADN et à la réponse aux dommages de l’ADN via des interactions avec des enzymes épigénétiques (writers/readers) et la machinerie de maturation des ARN. En modulant l’accessibilité de la chromatine et la stabilité du génome, CBX3 influence la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et les réseaux d’expression génique répondant au stress. Une activité dérégulée de HP1γ et des profils d’expression altérés de CBX3 ont été associés à des états épigénétiques aberrants observés dans de multiples contextes de cancers et de maladies du neurodéveloppement, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études sur la chromatine et le maintien du génome.

HP1γ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CBX3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HP1γ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CBX3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CBX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HP1γ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CBX3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HP1γ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HP1γ dans les cellules tumorales présentant une expression de CBX3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.