Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
HP1β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403235
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HP1β El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HP1β, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HP1β Anticuerpo (4D7B8): sc-517288
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HP1β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403235 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CBX1 codifica la proteína 1 beta de la heterocromatina (HP1β), un adaptador de cromatina conservado que reconoce H3K9me2/3 a través de su cromodominio y ayuda a compactar la cromatina mediante interacciones con las metiltransferasas de histonas SUV39H y otros represores. HP1β contribuye a la formación de heterocromatina, el silenciamiento transcripcional, la sincronización de la replicación del ADN y el mantenimiento de la estabilidad del genoma al coordinar la arquitectura de la cromatina de orden superior. También participa en las respuestas al daño del ADN y en la elección de las vías de reparación al modular la accesibilidad en los loci dañados e influir en el reclutamiento de factores de reparación. La desregulación de los programas epigenéticos vinculados a HP1β se ha asociado con estados de diferenciación alterados e inestabilidad genómica observados en diversos contextos de investigación sobre cáncer y neurodesarrollo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HP1β (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CBX1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CBX1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CBX1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HP1β.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CBX1 para la investigación de la señalización de HP1β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CBX1 críticos para la función de HP1β
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CBX1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HP1β CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HP1β CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CBX1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HP1β (h) y el plásmido HDR HP1β (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CBX1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CBX1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.