HoxD13 Double Nickase Plasmid (h): sc-404471-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HoxD13 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HoxD13 Double-Nickase-Plasmid (h) und HoxD13 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HOXD13 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HoxD13 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxD13 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXD13 kodiert HoxD13, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der embryonalen Entwicklung die Positionsidentität und Musterbildung steuert und insbesondere an der Morphogenese der Gliedmaßen und distaler Anhänge beteiligt ist. HoxD13 bindet über seine konservierte Homeodomäne an DNA, um genregulatorische Netzwerke zu koordinieren, die Segmentierung, Chondrogenese und Differenzierungsprogramme steuern, und integriert sich dabei in die übergeordnete Regulation des HOX-Clusters sowie in Morphogensignale wie SHH und WNT während der Gewebemusterung. Eine Störung oder Fehlregulation von HOXD13 verändert entwicklungsabhängige Transkriptionsprogramme und wurde mit angeborenen Gliedmaßenfehlbildungen, einschließlich Synpolydaktylie, in Verbindung gebracht, was es zu einem wertvollen Ziel für die Untersuchung von Genotyp-Phänotyp-Zusammenhängen in der menschlichen Entwicklungsbiologie macht.
HoxD13 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HOXD13-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HOXD13 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HOXD13-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HOXD13-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.