Particules Lentivirales d'Activation (m2) HoxB5: sc-420914-LAC-2

Le gène murin Hoxb5 code le facteur de transcription à homéoboîte HOXB5, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui contribue à établir la régionalisation antéro-postérieure et l’identité segmentaire au cours de l’embryogenèse. HOXB5 module des programmes d’expression génique contrôlant la différenciation mésodermique et neurale, en coordonnant des voies de développement impliquées dans la morphogenèse des tissus, la formation vasculaire et des voies respiratoires, ainsi que la spécification des lignées hématopoïétiques. Une activité de HOXB5 dérégulée et un déséquilibre du réseau HOX sont liés à des anomalies du développement et ont été associés à des états transcriptionnels oncogènes dans des modèles de malignités hématologiques, faisant de Hoxb5 un locus utile pour étudier la différenciation, l’auto-renouvellement et l’engagement de lignée. L’édition génétique de Hoxb5 dans des systèmes murins permet des études mécanistiques des éléments cis-régulateurs, des circuits transcriptionnels et du phénotypage développemental in vivo tout au long de l’organogenèse, ainsi que dans des contextes de cellules souches et progénitrices.

Les particules d'activation lentivirales HoxB5 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Hoxb5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HoxB5 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Hoxb5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HoxB5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Hoxb5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.